抗性只能抑制不含目的质粒的菌的生长，不能杀死，在你培养超过一定时间后，抗性消失，不含目的质粒的菌开始生长繁殖，而含有质粒的菌因为复制时需更多材料能量，所以在竞争上处于劣势，不含质粒的菌会大量增殖，含质粒的菌比例减小。

会不会是你培养时间久了?确认感受态没问题吗?。